鸽β-防御素5基因克隆及其抗菌活性

从鸽的骨髓和肝组织中扩增到2个禽β-防御素(avbd)基因，在大肠杆菌中高效表达，检测其重组蛋白的抗菌活性。应用rt-pcr方法从鸽的骨髓和肝脏组织中扩增avbd5基因，根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-5的氨基酸序列构建系统进化树，将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pgex-6p-1上进行原核表达，对该重组蛋白进行纯化，测定体外抗菌活性与理化特性。测序得到这2个基因的cdna大小均为201bp，编码66个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基。经遗传进化分析发现，该基因推导的两组氨基酸序列与鸭avbd5的同源性最高，分别为87.9％和78.8％，这两组氨基酸序列的同源性为83.3％。因此，将其分别命名为鸽avbd5α(骨髓)和鸽avbd5β(肝脏)。进一步将这两个基因分别亚克隆到大肠杆菌pgex-6p-1载体中进行原核表达。两个重组融合蛋白经纯化后，通过菌落计数法测定其体外抗菌活性，盐离子浓度对其抗菌活性的影响，及其融合蛋白的溶血活性。结果表明，重组鸽avbd5α、avbd5β融合蛋白的分子量约为32kda。具有明显的抗菌活性，对12种细菌均有不同程度的抑制作用，高盐浓度对其抗菌活性显著影响。此外，这两个重组蛋白对红细胞无显著溶血活性。