牛分枝杆菌mpb63基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以牛分枝杆菌vallee111染色体dna为模板，以mpb63成熟蛋白基因特异性引物进行pcr扩增，获得约400bp的dna片段.通过t-a克隆技术，将pcr产物克隆至pgem-tvector中，成功地构建出克隆载体pgem-t-63.以bamhⅰ和ecorⅰ双酶切pgem-t-63和pet28a(+)，并将纯化的mpb63基因亚克隆至pet28a(+)中，构建出原核表达载体pet28a-63.将pet28a-63转化至感受态e.colibl21(de3)中，经iptg诱导和sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，可见约18ku外源蛋白带.蛋白质印迹分析发现，该蛋白质具有牛分枝杆菌抗原性，从而为进一步研究mpb63的亚单位疫苗及dna疫苗奠定基础.