高效絮凝素毕赤酵母表面展示系统的构建

为了获得高效的脂肪酶毕赤酵母表面展示系统，利用来自酿酒酵母絮凝素蛋白flo1的n端874个氨基酸残基(fs)和c端的1101个氨基酸残基(fl)作为锚定蛋白分别构建了2套载体系统．带有前肽的米黑根毛霉脂肪酶(prorml)克隆到构建的2套展示载体中，使米黑根毛霉脂肪酶(rml)分别以n端锚定或c端锚定的方式实现在毕赤酵母细胞表面的展示．利用rmlc端的flag标签，通过流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜检测2套系统中rml在酵母表面的展示情况．研究发现，n端锚定于酵母表面的展示酶fsr以pnpc为底物时，水解活力达到了105.3u/g，大约为c端锚定的展示酶flr活力的2倍．同时fsr比flr具有更宽的温度、ph作用范围和更好的热稳定性．与游离酶和固定化酶相比，展示酶fsr也表现出更为优良的热稳定性．结果提示，基于flo1n端锚定的展示系统更适合展示活性中心近c端的脂肪酶，推动了展示酶的进一步研究和开发．