rna干扰chk1/2调控二烯丙基二硫诱导的g2/m期阻滞作用及相关周期蛋白表达

在细胞周期检测点信号传导通路中，chkl和chk2起着重要作用，主要参与g2/m期细胞周期检测点信号传导．首先采用rnai技术在bgc823细胞中将chk1、chk2基因沉默，chk1、chk2sirna转染bgc823细胞后24h加入15mg/l二烯丙基二硫(diallyldisulfide，dads)，接着通过real-timepcr、westernblot分析chk1、chk2基因在转染前后的表达差异，然后运用流式细胞术和westernblot分析chk1、chk2基因沉默后对dads诱导的细胞周期g2/m期阻滞作用及相关周期蛋白cdc25c和cyclinb1表达的影响．实验结果表明，与未转染对照组相比，转染chk1、chk2sirna后bgc823细胞中chk1、chk2表达明显被抑制，二者的mrna表达分别下降84.7%和69.0%，蛋白质水平分别下降73.4%和78.5%．流式细胞术分析结果发现，chklsirna转染的bgc823细胞在15mg/ldads处理24h后，g2/m期比例由单纯dads处理组的58.1%降至10.4%(p<0.05)．但chk2sirna转染后加入15mg/ldads，与单独15mg/ldads作用相比，细胞周期g2/m期比例差异不明显(p>0.05)．chk1和chk2下游分子的改变显示，dads可抑制bgc823细胞中cdc25c和cyclinb1表达(p<0.05)，但chk1基因沉默后加入dads，cdc25c和cyclinb1表达却不被抑制(p>0.05)，chk2基因沉默后对dads抑制cdc25c和cyclinb1表达的作用无影响．由此得出结论，chkl基因沉默可消除dads诱导bgc823细胞g2/m期阻滞作用，dads阻滞g2/m期可能是通过chk1/cdc25c/cyclinb1信号通路起作用．