低氧环境中微囊化成骨细胞支持造血干/祖细胞扩增

在模拟骨髓造血壁龛(hematopoieticniche)的氧分压条件下，探讨微囊化成骨细胞(osteoblasts，ob)对脐血造血干/祖细胞(hspc)体外扩增的支持和调控机理．分离培养人髂骨ob，采用聚电解质络合法将第3代的ob以密度为8×105ml包埋在直径为0.5mm的明胶-海藻酸钠-壳聚糖(gac)微胶珠中．将微珠+造血干/祖细胞(a′组)、造血干/祖细胞(b′组)及微珠(c′组)置于6孔板，在5%氧分压下进行培养．同时在20%常氧条件下设置同样分组培养作为对照(a，b，c)．通过流式细胞分析和半固体细胞集落培养，观察比较各培养体系中造血干/祖细胞的扩增，并检测体系内白血病抑制因子(lif)和白介素-6(il-6)的含量变化以探讨作用机理．经过倒置相差显微镜观察，人成骨细胞在微珠中分散均匀，生长状态良好．微珠内部有丰富的孔道供营养物质传递，有大量造血干/祖细胞弱黏附于微珠表面．经过7天的培养，a′、b′、a、b四组造血细胞的扩增倍数分别为(49.0±4.6)，(3.3±0.5)，(17.7±1.2)和(1.9±0.2)．a′、b′、a组的cd34+细胞分别扩增了(87.6±8.3)，(2.2±0.3)和(14.9±1.0)倍，b组则出现下降．a′、b′、a、b四组cfu-cs集落扩增倍数分别为(9.8±0.8)，(3.5±0.4)，(6.9±0.7)和(2.6±0.2)．低氧共培养体系比常氧共培养体系和非共培养体系对造血干/祖细胞的扩增有更大的促进作用．a′、b′、c′中il-6和lif含量明显高于对应的a、b、c组，与扩增倍数的差异相对应．微囊化成骨细胞对造血干/祖细胞扩增有明显的促进作用，5%氧分压接近体内造血壁龛氧环境，在此环境中成骨细胞分泌细胞因子量增多并通过其对造血干/祖细胞的扩增进行调节．