h9n2亚型禽流感病毒ha基因的克隆及其dna疫苗的动物免疫试验

血凝素(ha)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质.根据已发表的h9亚型aiv的ha基因序列，设计合成了1对h9ha特异引物，以aiva/chicken/henan/1/1999/(h9n2)核酸为模板，通过rt-pcr扩增出1条1.6kbcdna片段.将ha基因插入pvax1中，构建了真核表达质粒pvax-h9.采用活体电击法免疫3周龄spf鸡10只，剂量为50μg/只，3周后加强免疫一次，5周后以100倍鸡胚感染剂量(eid)的ha基因同源病毒对所有鸡进行攻毒.其间每周检测抗体水平变化，6周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离.结果为攻毒后免疫组鸡hi效价为9log2～10log2，对照组为2log2～4log2；免疫组病毒分离数为0/10，对照组为10/10.表明所构建的ha基因表达质粒可作为基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应.