应用tdi-fp技术分析宫颈癌组织hpv16e7基因a647g点突变

模板指导的末端碱基掺入反应结合荧光偏振检测技术(templatedirectdye-terminatorincorporationwithfluorescence-polarization，tdi-fp)是snp检测新技术.应用tdi-fp方法分析中国陕西hpv16阳性宫颈组织hpv16e7基因第647位核苷酸a→g热点突变(即a647g)，首先在hpv16阳性的91例宫颈癌及49例正常/宫颈炎妇女宫颈dna标本中，pcr扩增含647位点在内的hpv16e7部分基因,然后将紧邻647位点5′端的寡核苷酸探针与pcr产物内的模板杂交，并延伸一个与647位点碱基互补的荧光标记碱基：tamra-ddttp或r110-ddctp.用荧光偏振仪读取荧光偏振(fp)值，根据升高的相应fp值判断647位点碱基.结果表明，宫颈组织hpv16e7a647g的总体检出率为35.71%(50/140).宫颈癌组的a→g突变率为42.86%(39/91)，显著高于正常/宫颈炎组22.45%(11/49)的突变率(x2=5.778,p=0.016)，两组间的or值为2.59(95%ci=1.17~5.71).提示tdi-fp可用于hpv有意义点突变的分析；我国陕西地区妇女hpv16a647g突变率及其对宫颈癌的警示性与其他地区相比有明显差异，该地区携带此突变病毒株的妇女患宫颈癌的风险可能较高