蛋白质多肽文库构建中限制性显示技术的接头设计

为了探讨限制性显示(rd)技术在构建蛋白质多肽文库中灵活的接头设计，分别根据原核表达载体pet22b以及酵母表达载体pnmt-topo设计了三套接头，三套接头依次增加一个碱基以保证与之连接的片段总有可能表达正确的开放阅读框.然后以hiv-1b亚型代表株u26942全基因质粒dna为对象，利用rd技术分别建立了相应的蛋白质多肽文库.从每个库中各随机挑选12个克隆进行测序分析并进行蛋白质表达预测.结果从原核表达文库中获得了一个可以表达hivpol多肽的克隆，sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)结果显示该克隆在细菌bl21(de3)中有较高的表达，蛋白质印迹为阳性，与理论预测相符.这些结果提示，rd技术是一种建立基因组随机多肽文库的新方法，该方法灵活的接头设计可以满足不同的表达载体需求.