钙调蛋白结合蛋白及其磷酸化对癌细胞迁移能力的影响研究

轻链钙调蛋白结合蛋白(light-chaincaldesmon,l-cad)是一种肌动蛋白结合蛋白，它通过与肌动蛋白结合而稳定胞内微丝结构，在磷酸化作用下则能从微丝上脱离．在众多非转移性癌细胞以及永生化的正常细胞系中，l-cad的表达量很低甚至没有，但在高迁移活性的转移性癌细胞中，l-cad表达量显著上升，因此l-cad可能是维持转移性癌细胞高迁移能力的重要因素．为了探索l-cad如何调节转移性癌细胞迁移活性及其所处地位，以人源转移性乳腺癌细胞mdamb-231作为载体，一方面，在胞内高表达外源野生型l-cad及其磷酸化突变株，干扰胞内l-cad的磷酸化进程，从而考察l-cad磷酸化对细胞迁移的调节，另一方面，利用sirna技术，抑制l-cad在mdamb-231细胞内的表达量，检测l-cad对转移性癌细胞迁移活性的总体影响．通过细胞骨架荧光染色、细胞迁移小室、单细胞层次上的牵张力测定以及细胞基底脱黏附能力测定，结果显示：a．阻断mdamb-231胞内l-cad的磷酸化进程将显著抑制细胞的迁移能力，细胞骨架调整受阻，基底牵张力增加，细胞基底脱附能力下降；b．l-cad表达抑制的mdamb-231细胞失去了完整的细胞骨架，其迁移能力显著降低并与非转移性癌细胞mcf-7类似，而细胞骨架解聚导致mdamb-231细胞基底牵张力显著减少，更容易从基底脱附．总的来说，l-cad磷酸化是调节转移性癌细胞高迁移活性的重要分子开关，l-cad的高表达与高效磷酸化循环是维持转移性癌细胞高迁移活性的关键因素．探索了l-cad调节转移性癌细胞迁移活性的机制，也为认识转移性癌细胞的本质提供了新的思路．