鸡fbxo38转录剪接体1的克隆、表达和功能分析

f-box蛋白(f-boxproteins)广泛存在于真核生物，并且成员众多，功能多样．fbxo蛋白是一类c端没有亮氨酸重复序列(leucine-richrepeats，lrrs)和wd重复序列(wdrepeats)的f-box蛋白．本研究利用pcr和克隆测序的方法从鸡腹部脂肪组织获得一个未知全长编码区序列(codingsequence，cds)，序列分析显示，该序列是鸡fbxo38的一个转录体，本研究将其命名为鸡fbxo38基因转录本1(gallusgallusfbxo38transcriptvariant1，gfbxo38t1)．real-timereversetranscriptase-pcr分析显示，gfbxo38t1广泛表达于肉鸡多种组织，其中胰腺、回肠和腹部脂肪组织中表达水平较高．进一步分析发现，gfbxo38t1在高、低脂系1～12周龄肉鸡腹部脂肪组织中均有表达，并且在3和4周龄时，低脂肉鸡腹部脂肪组织中gfbxo38t1的表达水平显著高于高脂肉鸡(p<0.05)，其余时间点两系间没有显著差异(p>0.05)．在鸡前脂肪细胞(stromal-vascularcells，sv)诱导分化过程中，gfbxo38t1的表达量随着脂肪细胞分化而呈现下降趋势，此外，gfbxo38t1在前脂肪细胞中的表达量明显高于成熟脂肪细胞(fatcells，fc；p<0.05)，暗示gfbxo38t1可能是鸡脂肪组织形成的负调控因子．报告基因分析显示，过表达gfbxo38t1抑制ccaat增强子结合蛋白α(ccaat/enhancer-bindingproteinα，c/ebpα)、脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase，lpl)、脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase，fasn)和脂肪酸结合蛋白4(fattyacid-bindingprotein4，fabp4)基因的启动子活性(p<0.05)，从另一个角度提示了gfbxo38t1对鸡脂肪组织形成具有抑制作用．同时过表达鸡klf7和gfbxo38t1并不能显著增强过表达gfbxo38t1对鸡lpl、fasn和fabp4基因启动子活性的调控作用，暗示gfbxo38t1对这些基因的调控不完全依赖于鸡转录因子klf7．本研究为进一步研究鸡脂肪细胞分化和fbxo38的生物学功能提供参考．