凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立及初步应用

建立了凝集素芯片技术检测糖蛋白的方法，对实验条件进行了优化，应用凝集素芯片初步检测分析了chang?蒺sliver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成．将凝集素cona、gna固定于环氧化修饰的玻片表面，用cy3标记标准糖蛋白rnaseb，利用凝集素识别特异糖链的原理建立凝集素芯片检测糖蛋白的方法．摸索出最佳封闭剂是含1%bsa的磷酸缓冲液，最佳孵育时间及温度为3h和室温，最佳孵育缓冲液为含1%bsa和0.05%tween-20的磷酸缓冲液，并用甘露糖抑制实验验证了凝集素芯片结合的特异性．用包含10种凝集素的芯片，成功解析了标准糖蛋白rnaseb、fetuin的糖链构成，证实了凝集素芯片检测糖蛋白糖链的可行性．最后用凝集素芯片初步检测分析了chang?蒺sliver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成，发现chang'sliver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白可能有多价sia或glcnac、terminalα-1，3mannose、galnac、galβ-1，4glcnac这些糖链结构的存在．蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰，它在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、细胞癌变等生命活动中起着重要作用，因此近年来蛋白质的糖基化研究受到广泛的重视，但由于缺乏一种简便、快速、高通量的检测手段，蛋白质糖基化修饰的研究发展缓慢．凝集素芯片技术的出现实现了对糖蛋白的快速、准确、高通量的检测分析．