pcr-特异探针杂交检测肿瘤组织ki-ras基因点突变

用福尔马林固定-石腊包埋的人肿瘤组织切片,经脱腊处理直接用pcr(poly-merasechainreaction)技术扩增ki-ras癌基因序列中包括12,13位密码子的dna片段,并分别以5种含特异突变点的寡核苷酸探针代替3′端引物,经pcr扩增的产物作为点突变的阳性对照.用上述五种探针进行选择性斑点杂交,检测了人肺癌及结直肠癌组织的ki-ras基因12及13位点突变.为了封闭杂交时的非特异结合,采用野生型冷探针与标记的含突变点的探针同时进行杂交的方法,有效地消除了杂交过程中可能产生的假阳性,而不影响真阳性反应的出现.因而增加了检测的可靠性.