嗜肺军团菌mip/ctxb融合基因体外表达与动物免疫试验的免疫原性研究

ｐｃｒ扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxb基因，克隆入载体pcdna3.1(+)，重组子经限制性酶切分析、pcr、序列分析鉴定正确后，命名为pcdna3.1-mip/ctxb.脂质体法将重组质粒pcdna3.1-mip、pcdna3.1-mip/ctxb转染nih3t3细胞，用免疫荧光法和蛋白质印迹鉴定瞬时表达和稳定表达产物，结果发现：重组质粒成功转入细胞并获得短暂表达，稳定转染细胞分别在24ku和35ku处检测到阳性杂交信号.将pcdna3.1-mip、pcdna3.1-mip/ctxb作为dna疫苗免疫balb/c小鼠，检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、ifn-γ产生水平、细胞毒性t淋巴细胞(ctl)杀伤活性等体液免疫和细胞免疫反应的指标，评价疫苗的免疫原性.结果发现：各实验组均检测到免疫原性，pcdna3.1-mip/ctxb免疫组的免疫原性高于pcdna3.1-mip免疫组，有显著性差异(p＜0.01).研究结果为mip/ctxb融合基因dna疫苗的研制提供了初步的实验依据.