颗粒酶b和胱天蛋白酶-3对肌动蛋白水解作用的体外研究(英)

已知凋亡过程的基本变化之一是细胞骨架的异常，后者在某种程度上决定凋亡细胞的形态学特征.为揭示凋亡相关蛋白酶——颗粒酶b和胱天蛋白酶-3对胞浆型肌动蛋白的水解作用，采用成年猕猴脑组织粗提物作为无细胞体系，以外源性颗粒酶b触发凋亡途径的终末反应.经一系列免疫印迹分析发现:孵育12h方见β-肌动蛋白被剪切，产生41ku和15ku水解片段，并证明该水解反应为颗粒酶b依赖；颗粒酶b活化的内源性胱天蛋白酶-3和重组胱天蛋白酶-3均不能水解脑提取物中的β-肌动蛋白，尽管胱天蛋白酶-3可作用于纯化的肌动蛋白，产生15ku片段.以上结果提示，内源性β-肌动蛋白对凋亡相关蛋白酶，尤其胱天蛋白酶-3不敏感，这可能与该蛋白质的空间结构特征或脑组织中存在的某种蛋白酶抑制因子有关.