分泌蛋白特异性基因陷阱的设计与验证

蛋白质分子向细胞外分泌的过程有赖于信号肽的介导.基因陷阱是功能性基因克隆的一种有效方法，经典的基因陷阱以geo作为报告基因，对所克隆的基因类型没有选择性.将绿脓杆菌外毒素、2a序列、il-2受体穿膜区以及新霉素磷酸转移酶的基因依次融合构建新型报告基因——peo，该报告基因能够特异性地甄别具有信号肽编码序列的基因.为验证peo对信号肽编码序列的特异性甄别作用，以peo为报告基因，构建了3种质粒载体，分别模拟用基因陷阱载体进行筛选时可能出现的3种情况，通过转染hela细胞、g418筛选以及碱性磷酸酶检测，证明peo能够有效地区分信号肽和非信号肽编码序列，以peo为报告基因改造的基因陷阱载体可以用于分泌蛋白基因的筛选.