一种人胰岛素类似物的制备、鉴定与活性研究

采用pcr方法，将人胰岛素分子b链b10位his突变为glu，在b25和b26位之间插入glu，构建了［b10glu，b25-glu-b26］胰岛素原融合蛋白基因.利用通用型质粒pbv220构建表达载体，在大肠杆菌dh5α中表达，表达蛋白为包含体形式，约占菌体总蛋白的20%～30%.经过复性、凝胶过滤等步骤得到胰岛素原融合蛋白.用胰蛋白酶和羧肽酶b酶切，经过deae离子交换和rp-hplc纯化得到胰岛素突变体类似物，并经过质谱测定鉴定.凝胶过滤法测定了蛋白质分子自身的缔合性质，圆二色谱（cd）测定了构象的变化.并分别测定了放免活性、受体结合活性及小白鼠低血糖惊厥实验.结果表明，突变体分子缔合性明显下降.放免活性和受体结合活性分别约为标准胰岛素的63.5%和114.4%，整体活力略高于天然胰岛素.