黑色素皮质素受体激动剂的高通量筛选模型研究

为了建立黑色素皮质素受体（mc4r）激动剂的高通量筛选方法，将人的mc4r基因质粒（hmc4r/pcdna3.1）与报告基因质粒（3×cre/3×mre/sre-luc）按1∶5的比例共转染到hek293细胞，通过g418筛选，建立了稳定的mc4r激动剂筛选细胞株.利用mc4r内源激动剂α-msh探索和优化了每孔接种细胞数目、激动剂孵育时间、溶剂dmso终浓度、荧光素酶底物浓度等筛选条件，建立了可靠的筛选方法.实验表明：当细胞数目为4×104个/孔,激动剂孵育时间为8h,每孔dmso终浓度小于1％和α-msh终浓度为1μmol/l时，系统z'-因子接近0.7，能够用于mc4r激动剂的高通量筛选.