噬菌体展示proteina及proteinlig结合单结构域随机组合文库及ig亲和筛选

proteina和proteinl是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin，ig)结合分子，在细菌的致病中起重要作用.用含sacⅰ位点的特定引物pcr分别扩增制备proteina的a、b、c、d抗体结合结构域和proteinl的b3抗体结合结构域，各结构域dna片段经sacⅰ酶切后，再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库，将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示ig结合分子单结构域随机组合文库，所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位，滴度为4.1×1011tu/ml，包含各种单结构域片段，并以随机方式连接.用人ig对该文库进行4轮亲和筛选，随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明，亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的ig结合分子结构，其中32个克隆具有由proteinl的单结构域和proteina的单结构域间隔重复排列而成的特征性(mdpl-mdpa)n结构.对噬菌体展示ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试，为ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径，也为ig结合分子的定向改造打下基础.