人间隙连接蛋白31相互作用蛋白annexinⅱ的筛选与证实

间隙连接蛋白31(connexin31，cx31)是间隙连接蛋白(connexin)家族的一员，目前对于cx31的功能及其调节方式知之甚少.采用固相多肽合成的方法合成cx31羧基端一个多肽片段(250~266)，经hplc纯化后偶联到匙孔血蓝蛋白，免疫新西兰雄兔后采血检测、并纯化、经蛋白质印迹、细胞免疫荧光染色、免疫沉淀证实得到的抗体为特异性抗cx31的抗体.运用制备的抗cx31多克隆抗体免疫沉淀，sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)分离，蛋白质条带回收，蛋白质胶块酶解，q-tof质谱分析，数据库扫描筛选可能相互作用蛋白，运用抗体pull-down实验，筛选到可能相互作用蛋白annexinⅱ，经过免疫共沉淀、细胞免疫共定位等实验证实annexinⅱ与cx31相互作用.