red/et同源重组介导细菌人工染色体的快速修饰

随着基因组测序工程的实施与完成，如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(bac)进行有目的修饰，已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的red/et同源重组技术对目标bac进行修饰，以psc101-bad-gbaa为依托质粒，采用rpsl-neo为正/反向筛选系统，可以快速、高效地对bac进行剪切、插入、替换等操作，其中能够进行抗性筛选的一步bac修饰只需一周时间，以插入非抗性标记基因cre为代表的两步bac修饰在两周内即可完成.通过阿拉伯多糖诱导调控和简单地变化培养温度，能使psc101-bad-gbaa依托质粒在发挥完red/et同源重组作用后自然消失，最终获得完整而纯净的修饰后bac，为加快功能基因组学研究提供了一个可靠的实验平台.