核定位信号在热休克蛋白70抑制氧化应激所致细胞核仁分离中的作用

为探讨核定位信号在热休克蛋白70(hsp70)抑制h2o2所致核仁损伤中的作用，采用分子克隆技术分别构建了4个真核表达载体，pcdna3.1(-)-hsp70wt(hsp70野生型)，pcdna3.1(-)-hsp70δnls(核定位信号缺失突变体)，pegfp-n1-hsp70wt，pegfp-n1-hsp70δnls.向传代培养的c2c12肌源细胞培养液中加入终浓度为1.0mmol/l的h2o2模拟体外氧化应激.甲苯胺蓝染色细胞核仁发现，正常细胞仅有一个位于中央的、浓染致密的核仁颗粒.过氧化氢处理后3h，可见明显的核仁分离.热休克反应处理的细胞及转pcdna3.1(－)-hsp70wt细胞则能明显抑制氧化应激所致的核仁分离.荧光蛋白示踪及核仁蛋白质免疫印迹分析显示，h2o2处理后1h，hsp70wt由正常时的细胞浆定位转为细胞核及核仁定位，而hsp70δnls在h2o2处理后仍定位于细胞浆，同时丧失了抑制核仁分离的作用.上述结果提示，野生型hsp70能显著抑制氧化应激所致细胞核仁分离，核定位信号通过介导hsp70向细胞核及核仁移位而决定hsp70对核仁损伤的保护作用.