禽副粘病毒-2膜融合相关多肽基因的构建与表达

囊膜病毒与宿主细胞的膜融合是病毒入侵宿主细胞的第一步.禽副粘病毒-2(apmv-2)囊膜表面糖蛋白有2种，与宿主受体结合的血凝素神经氨酸酶(hn)及介导膜融合的融合糖蛋白(f).hn蛋白的茎部区域(stalkregion)与球状头部区域(globularheadregion)，以及f蛋白的3段七肽重复区域(heptadrepeat，hr)都可能与膜融合直接相关，将5段多肽进行基因的构建与表达研究.根据已发表的禽副粘病毒-1(apmv-1)氨基酸序列，应用blast程序进行同源性分析，以确定apmv-2相应区域，使用搭桥pcr或普通pcr方法构建基因，分别克隆入表达载体pgex-6p-ⅰ获得重组质粒，阳性重组质粒转化入大肠杆菌bl21(de3)，表达后获得可溶性融合蛋白，3c蛋白酶酶切后的蛋白质混合物经glutathione-sepharose4b亲和层析纯化，最终获得可溶性、高纯度的5段多肽.应用learncoil-vmf软件与expasy系列软件对蛋白质结构与功能进行预测与分析.分子筛实验结果表明，f蛋白的hr1与hr2可形成六聚体结构，圆二色谱实验结果则表明，六聚体蛋白富含α琢螺旋结构.