噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选

淋巴毒素(lymphotoxin，lt)通过tnfr1受体传递凋亡信号，从而发挥抗肿瘤活性.对lt的受体结合区域进行多点随机突变，利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhlt)r46，s106，l130三点随机突变组合文库和s106～f110区域随机突变体库.噬菌体库与固相化tnfr1受体进行亲和筛选，富集了能与tnfr1受体结合的rhlt突变体.随机挑选20个单克隆噬菌体进行elisa受体结合鉴定，其中80％的克隆与tnfr1受体特异性结合，有4个克隆与tnfr1受体的结合能力高于野生型序列的rhlt.将这4个结合力高的突变体克隆于pet32a(+)载体，经过大肠杆菌表达和纯化操作后，检测这些突变体蛋白与tnfr1受体的结合活性和对l929细胞的杀伤活性，发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合，其中c199克隆与tnfr1的结合活性比野生型序列的rhlt提高了近30％，且其对l929细胞的杀伤活性提高了近90%.应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试，为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路，可成为大分子药物开发的有效工具.