口蹄疫病毒免疫活性串联片段fb的表达及免疫原性测定(英)

将口蹄疫病毒(fmdv)免疫串联片段fb克隆至原核表达载体pbad/topo中，经鉴定后得到重组质粒pbad-fb，将此重组质粒转化到受体菌top10中，用诱导剂阿拉伯醛糖分别以不同的浓度进行诱导，并在不同诱导时间进行采样，经处理后做sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)、蛋白质印迹分析.结果发现以终浓度为0.002%的阿拉伯醛糖进行诱导，4h后表达可达到高峰，其大小约为26ku，软件扫描结果显示，fb融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的28.9%，能与抗fmdv抗体发生特异性反应，融合蛋白以包涵体和可溶形式存在.将融合蛋白的可溶性组分用50%ni-nta树脂过柱纯化并抽提融合蛋白的包涵体，经过洗涤后分别制成油乳剂疫苗，经皮下注射免疫豚鼠，用乳鼠中和试验测定豚鼠血清中和指数，并用口蹄疫病毒对豚鼠进行攻毒.结果表明，用此融合蛋白的纯化产物和包涵体免疫豚鼠能诱导产生高滴度的中和抗体，对病毒的攻击提供100%的免疫保护.