sars冠状病毒实时荧光rt-pcr定量检测

为建立一种快速、准确、特异的sars病毒rna定量检测方法，根据复合探针荧光定量分析原理，对sars病毒核酸进行实时荧光定量rt-pcr检测.借助计算机辅助，对sars病毒基因靶序列以及检测引物和探针进行了优化筛选；利用体外转录sars病毒rna靶序列，对rt-pcr反应的镁离子浓度参数进行了优化；比较trizol法、磁珠法、qiagen法、煮沸法等4种方法提取rna的检测效果，建立了样本处理方法；通过对构建的体外转录靶序列模型的检测，对本方法的灵敏度、特异性、定量线性关系、精确度等进行了评价，并通过对42例临床标本的检测对本方法的检测效果进行了评估.通过克隆sars病毒核酸靶序列并进行体外转录，获得了长度约1.2kb的体外转录rna靶序列；经优化，荧光rt-pcr反应液中的mg2+浓度以4.0mmol/l为最好；rna提取方法采用磁珠法效果较好；本方法的检测灵敏度最低可达5个拷贝的体外转录rna分子，特异性100%，ct值的cv值小于5%.对临床确诊的42份sars病人血清和漱口水标本的检测结果表明，该方法的检出率为79%，与荧光抗体检测法的符合率为70%.上述结果表明，该方法建立的荧光定量rt-pcr技术能够快速准确、特异、敏感地对sars病毒核酸进行定量分析，为临床sars冠状病毒rna的检测提供了新的，更为有效的检测方法.