利用htm表达细胞株制备抗人血栓调节蛋白单克隆抗体

为了研制抗人血栓调节蛋白(htm)的单克隆抗体(mab)，给经cho细胞免疫的balb/c小鼠腹腔注射环磷酰胺诱导其对cho和cho-tm5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受，再用高效表达htm的cho-tm5常规免疫小鼠．细胞融合后，elisa筛选分泌抗htm的特异性mab阳性克隆，并将其腹腔注射balb/c小鼠诱生腹水．腹水中的mab经亲和层析纯化后，采用elisa、流式细胞术、免疫组织化学染色法及westernblotting对其进行特异性鉴定．结果显示，共获得了5株阳性克隆，其中2f7可稳定分泌igg1亚型的mab，腹水抗体效价为1×10-6，含量为19.56g/l．2f7在体内与正常组织的交叉反应极少，对huvec、cho-tm5有特异性结合，并可识别细胞裂解液还原条件下分子质量为105ku左右的蛋白质多肽．2f7的解离常数kd约为1.22×10-9mol/l．实验结果表明，通过采用新的技术路线，直接应用htm表达细胞株免疫小鼠，成功制备了具有高度特异性与高亲和力的抗htmmab，为其他来源困难的蛋白质mab制备提供了可借鉴的技术方案，同时2f7的研究鉴定为进一步应用抗htmmab进行htm生物学功能及临床意义研究提供了新的物质基础．