stat3与mapk蛋白协同调节肿瘤坏死因子-α转录活性

探讨信号转导和转录激活因子3(signaltransducerandactivatoroftranscription3,stat3)与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,mapk)在体内是否存在相互作用，并观察其作用如何影响肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor,tnf-α)的转录活性．采用聚合酶链反应技术，从人flag-p38和flag-细胞外信号蛋白调节激酶2(extracellular-signalregulatedproteinkinase2,erk2)中扩增出p38和erk2基因，将其插入载体pcdna3-ha中；用westernblot方法在293t细胞中检测其表达后应用免疫共沉淀技术检测stat3蛋白与p38/erk2蛋白之间是否存在相互作用．然后应用报告基因技术检测这种相互作用如何影响tnf-α的转录表达，并在应用rna干扰技术将stat3通路抑制后，观察tnf-α启动子转录活性如何变化．酶切和测序结果表明，扩增的p38和erk2基因序列正确，大小为1080bp，在293t细胞中正确表达大小约40ku的p38和erk2蛋白．免疫共沉淀实验结果证实，p38和stat3蛋白以及erk2和stat3蛋白在体内相互作用．下游基因tnf-α荧光素酶活性实验显示，p38和stat3蛋白以及erk2和stat3蛋白复合物协同升高tnf-α的活性，应用stat3的干扰rna后其活性则明显下降．该研究表明，stat3和p38/erk2蛋白在体内存在相互作用，stat3与p38、stat3与erk2均对tnf-α的表达发挥协同效应，在阻断stat3通路后，stat3与p38、stat3与erk2对tnf-α表达的协同效应将明显降低．