一种适用于生产转染色体动物的微细胞制备方法

微细胞介导的染色体转移技术(mmct)是一项将外源染色体转入哺乳动物细胞的技术，具有广阔的应用前景.与体细胞核移植技术结合，mmct可用于生产具有重要医学药用价值和优良农业生产性状的转染色体动物.制备高质量的微细胞是关系mmct技术成功的关键步骤之一.通过荧光染色和吉姆萨染色分析，结果表明，a9(neo12)细胞经0.2mg/l秋水仙素酰胺处理48h后，89%的细胞产生微核化，每个细胞平均形成10个微核.微核化的细胞在含有20mg/l细胞松弛b的percoll密度梯度介质中，经39000g高速离心后，包含微细胞、完整细胞、细胞核和细胞碎片的混合液，依次通过8μm和5μm孔径的滤膜过滤后可获得纯化的微细胞溶液.通过光学显微镜和吉姆萨染色观察，可见微细胞为一群直径约为3～5μm的类细胞核的球形物质.微细胞pcr技术首次用于检测微细胞溶液的质量，检测结果显示，所制备的溶液中均匀分布着带有目的染色体的微细胞，适用于进一步作转染色体动物实验.