四倍体补偿技术的建立及其应用

常规基因剔除小鼠的获得主要是利用es细胞的全能性先获得嵌合体小鼠，再利用es细胞的生殖系传递能力，通过嵌合体与野生型小鼠的交配获得杂合子小鼠．而四倍体补偿技术则可绕过嵌合体小鼠阶段，直接获得基因修饰杂合子小鼠．利用电融合技术和piezoelectricmicroinjection显微注射技术建立了四倍体补偿技术，小鼠四倍体胚胎的获得率(电融合率)为(93.01±1.37)%，经体外培养囊胚形成率为(82.49±2.08)%．通过显微注射方法将2种129品系小鼠来源的es细胞(cj7和scr012)注射到四倍体囊胚腔中，获得了完全es细胞来源的小鼠，es鼠的获得率分别为2.7%和8.3%．经微卫星dna检测，成体小鼠的10个被检测组织均为129小鼠来源的．同时，也利用基因修饰的es细胞进行了研究，获得了2种基因修饰的完全es细胞来源的杂合子小鼠，部分小鼠具有繁殖能力，经繁育已获得了纯合子，其中凝血因子ⅷ基因敲除小鼠获得了预期的血友病小鼠表型．上述结果说明四倍体补偿技术可应用于基因修饰小鼠的制备．