拟南芥谷胱甘肽s-转移酶zeta类进化酶的获得及其特性分析

拟南芥谷胱甘肽s-转移酶zeta类(atgstz)是一种与细胞代谢和环境净化密切相关的多功能酶．应用易错pcr和多轮dna洗牌技术构建了atgstz随机突变文库，再利用ph指示剂颜色改变法对突变文库进行筛选，获得了9个二氯乙酸脱氯活性提高的突变子．其中，nn23含25个氨基酸突变，比活力提高120%，nn20含24个氨基酸突变，比活力提高102%，ec1含2个氨基酸突变，比活力提高47%，其他6个为单点突变，比活力分别提高9%～60%．酶学分析显示，所有进化酶对底物二氯乙酸的催化效率和对谷胱甘肽的亲和力以及个别进化酶的复性能力都得到不同程度的提高，但热稳定性均没有明显改善．同时，对一系列与atgstz空间折叠及催化活性相关位点进行了讨论．