慢病毒介导的rna干扰ppgalnac-t2基因表达抑制jurkat细胞增殖和迁移

在肿瘤中，黏蛋白o-糖基化有着重要的生物学功能．控制o-糖基化起始合成的是多肽∶n-乙酰氨基半乳糖转移酶家族，研究该酶家族对阐明o-糖基化在肿瘤中的作用机制有重要的意义．探讨了靶向干扰ppgalnac-t2基因表达对白血病jurkat细胞株增殖及迁移的影响．首先合成ppgalnac-t2特异shrna干扰及对照序列，将其连接至慢病毒干扰载体yh1；重组载体经双酶切、测序鉴定正确后与包装质粒共转染293t细胞，获得的病毒颗粒经过滤纯化后感染jurkat细胞，流式细胞分选仪进行细胞分选以获得ppgalnac-t2基因稳定干扰表达的jurkat细胞，然后使用rt-pcr和westernblot方法对各组别细胞中ppgalnac-t2基因表达情况进行分析，以确定ppgalnac-t2基因表达被有效干扰；进一步利用mtt实验和transwell实验分析ppgalnac-t2基因干扰表达对jurkat细胞增殖及迁移的影响．结果表明，成功构建了靶向干扰ppgalnac-t2基因表达的慢病毒载体，感染jurkat细胞后能稳定干扰ppgalnac-t2基因表达．mtt和transwell实验研究发现，下调ppgalnac-t2基因表达对jurkat细胞增殖和迁移有抑制作用．