利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中mutm的相互作用蛋白

mutm(formamidopyrimidine-dnaglycosylase，fpg)是原核生物碱基切除修复系统(ber)中同时具有dna糖苷酶和脱嘌呤/脱嘧啶ap裂解酶活性的一种双功能酶，不但可以识别dna损伤，而且能切除损伤的碱基，从而参与到许多种损伤的修复过程．除了高致突变率的8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine，8-oxog)外，mutm在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚．本研究主要以耻垢分枝杆菌(m.smegmatis)为研究对象，利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与mutm相互作用的蛋白因子进行发现和鉴定，并于体外用far-western和gstpull-down方法对鉴定出的蛋白dead-boxrnahelicase、rpsc、uvra与mutm的相互作用进行了验证．实验结果表明，利用串联亲和纯化方法来发现mutm相互作用的蛋白是切实可行的．本研究为进一步深入研究mutm在其参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点．