肌球蛋白轻链激酶非激酶活性调节磷酸化肌球蛋白atp酶活性及肌丝运动

肌球蛋白轻链激酶(myosinlightchainkinase，mlck)具有激酶和非激酶活性，在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用．为进一步阐明mlck非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用，利用已删除部分激酶区域的mlck重组体(pgex-f6.5)在大肠杆菌中进行表达，采用亲和层析技术纯化表达的mlck片段，应用enzchek磷分析试剂盒检测mlck片段对磷酸化肌球蛋白、水解重酶解肌球蛋白(heavymeromyosin，hmm)及肌球蛋白亚片段1(subfragment1，s1)atp酶活性的影响，体外检测mlck片段对肌动蛋白肌丝运动的调节．研究结果显示，pgex-f6.5重组表达载体在大肠杆菌中以可溶性gst融合蛋白的形式表达．该融合蛋白经glutathione-sepharose4b纯化、sds-page鉴定得到较纯的单一表达条带．纯化的mlck片段对磷酸化肌球蛋白、hmm和s1的atp酶活性均有明显激活作用．mlck片段激活磷酸化肌球蛋白atp酶活性为：vmax=(19.426±1.669)倍；km=(0.486±0.106)μmol/l，mlck片段对磷酸化hmm和s1的atp酶活性也有相似的刺激作用．体外肌丝运动研究表明，随着mlck片段浓度的增加，磷酸化肌球蛋白与肌动蛋白结合的数量不断增加，肌丝运动的速度也随之增加．上述结果表明，mlck的c端非激酶活性具有调节磷酸化的肌球蛋白atp酶活性及肌丝运动的作用．