含短c肽人胰岛素原类似物desb30在毕赤酵母中的表达及纯化

合成含短c肽aak，并去掉b链第30位苏氨酸(t)的人胰岛素原类似物：hmpidesb30(humanmini-proinsulindesb30)的cdna，将其插入大肠杆菌和酵母菌的穿梭质粒ppic9k．用电转移的方法将重组质粒hmpidesb30/ppic9k转入甲醇酵母gs115．用含不同g418浓度的ypd平板筛选高拷贝重组子．经优化条件下的高密度发酵，发酵液用sipi-40大孔树脂吸附，大孔吸附树脂洗脱液经sp柱进一步纯化后，再用10～20mmol/lzn2+沉淀，能得到纯度为95%的hmpidesb30．通过16.5%tricinesds-page、hplc和质谱分析，表达产物分子质量与理论分子质量相符，经高密度发酵，表达量可达1.0g/l．纯化回收率可达60%．说明人胰岛素原类似物hmpidesb30能在甲醇酵母中高效分泌表达，并能通过经济有效的方法纯化．