靶向e2f1的shrna抑制眼内视网膜母细胞瘤生长

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，rb)中由于rb基因缺失或失活，转录调控因子e2f1始终处于活化状态，细胞不断增殖，e2f1活性增加是恶性肿瘤的普遍现象．根据人e2f1基因设计了3段shrna，构建rna干扰表达载体psilencer-she2f1，瞬时转染人视网膜母细胞瘤细胞株hxo-rb-44和人肝癌细胞株smmc-7721，通过荧光定量pcr检测e2f1表达水平的变化，pi(碘化丙锭)染色检测细胞周期各时相细胞数量以检测其对细胞周期的影响．根据筛选出的有效shrna序列构建腺病毒载体并包装出腺病毒ad-she2f1，在裸鼠前房模型中，体外按50moi的感染系数感染稳定表达绿色荧光蛋白(gfp)的人视网膜母细胞瘤细胞株48h后，收集细胞，将2×105细胞注射到裸鼠眼前房内，连续观察眼内肿瘤细胞生长情况并拍照记录．通过转染肿瘤细胞株检测e2f1转录水平，筛选到1个能明显抑制肿瘤细胞内e2f1表达的shrna序列，并使细胞周期中s期细胞数减少．经ad-she2f1感染的rb肿瘤细胞与对照相比较，其在裸鼠眼前房内肿瘤生长减缓．结果说明，有效抑制he2f1表达的shrna具有抑制体内外人视网膜母细胞瘤生长的作用．