利用酵母双杂交系统筛选水稻类受体激酶oswak50胞内域相互作用蛋白

细胞壁连接的类受体激酶(wall-associatedkinase，wak)是植物细胞中一类特有的类受体激酶基因亚家族，因其胞外域与细胞壁紧密相连而得名．水稻中共有125个oswak基因，oswak50编码的蛋白质具有胞外域、跨膜域和激酶域，呈现典型的wak样受体激酶特征．首先通过对oswak50-gfp融合蛋白的观察发现oswak50定位于细胞膜并且与细胞壁偶联．进而通过酵母双杂交系统筛选到了20个可能与oswak50胞内域相互作用的候选蛋白，并通过一对一酵母转化验证了ossk4、osswib和osswi3c全长均可与oswak50胞内域相互作用．进一步分析显示，osswib能够直接与oswak50激酶域互作，而ossk4和osswi3c与oswak50胞内域的互作是依赖于oswak50c端的．研究还表明，ossk4和osswib亦能与oswak50同源基因oswak53a结合，而osswi3c则不能与oswak53a结合．双分子荧光互补实验证明，ossk4与oswak50和oswak53a能够在植物体内发生互作．以上结果为阐明oswak50发挥功能的分子机制提供了重要线索．