大鼠脑组织中一氧化氮合酶测定

在含有一氧化氮合酶(nos)底物左族精氨酸(l-arg),辅助因子还原性辅酶ⅱ(nadph)、四氢生物蝶呤(bh4)、黄素单核苷酸(fmn),黄素腺嘌呤二核苷酸(fad)以及ca2+、钙调蛋白等溶液中加入大鼠脑组织匀浆离心上清液,组成酶反应体系.37℃温育80min,应用n-(1-萘基)-乙二胺、对氨基苯磺酸的重氮、偶氮反应测定酶反应体系中一定时间内no代谢产物no-2浓度变化,建立一种简便的nos活性测定方法.反应体系最佳ph为7.4,km=0.1mmol/l,体系内no-2生成量与加入样品量之间有良好线性关系(r=0.998).此方法简单、方便、重复性好,批内cv为3.69%,批间cv为5.16%.10只健康大鼠脑组织中nos活性为(39.61±7.64)nmol/(min·g).