克隆化反向杂交探针的制备

反向斑点杂交是将寡核苷酸探针固定在膜上，用标记的靶序列与固定在膜上的探针进行杂交．与正向杂交相比，它通过一次杂交即可确定多种基因型，是一种快速筛查dna点突变的诊断方法.我们选择β－地中海贫血基因-28(a→g),cd17(a→t)andcd41～42(-ttct)三种点突变为模型采用pcr扩增产生串联多拷贝序列探针并将其克隆化．将克隆化探针固定于尼龙膜上，与同位素标记的β－珠蛋白基因pcr片段进行杂交，检测β－地贫患者的基因型．