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生物化学与生物物理进展 2004
鼻咽癌细胞中p53相互作用蛋白质的分离和鉴定Keywords: p53,鼻咽癌,免疫共沉淀,液相色谱-电喷雾串联质谱,相互作用蛋白,蛋白质印迹 Abstract: 鼻咽癌中p53基因突变罕见,但绝大部分鼻咽癌中存在p53蛋白过表达/聚集且功能失活.然而,到目前为止p53蛋白失活的机制仍然不清楚.为揭示鼻咽癌中p53蛋白功能失活的机制,采用免疫共沉淀技术分别富集鼻咽癌细胞系hne1和hne2的p53结合蛋白,sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取p53结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(lc-esi-ms/ms)分析,得到相应的肽序列标签(peptidesequencetags,pst),通过搜索数据库在鼻咽癌细胞系中鉴定了9个p53结合蛋白.分别是热休克蛋白70(hsp70)家族成员grp-78和grp-75、hsp90家族成员grp-94、核纤层蛋白a/c(lamina/c)、α-actinin4、ezrin/cytovillin、dna复制准许因子/mcm3蛋白(dnareplicationlicensingfactor/minichromosomemaintenance3protein,mcm3)、cd98/4f2heavychain和蛋白激酶c(pkc).并用免疫共沉淀和蛋白质印迹分析技术对hne1细胞蛋白条带3鉴定的p53相互作用蛋白之一hsp78进行了验证.首次在鼻咽癌细胞中鉴定了9个p53结合蛋白,为阐明鼻咽癌中p53蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索.
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