鼻咽癌细胞中p53相互作用蛋白质的分离和鉴定

鼻咽癌中p53基因突变罕见，但绝大部分鼻咽癌中存在p53蛋白过表达/聚集且功能失活.然而，到目前为止p53蛋白失活的机制仍然不清楚.为揭示鼻咽癌中p53蛋白功能失活的机制，采用免疫共沉淀技术分别富集鼻咽癌细胞系hne1和hne2的p53结合蛋白，sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）对免疫沉淀复合物进行分离，从胶中切取p53结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱（lc-esi-ms/ms）分析，得到相应的肽序列标签（peptidesequencetags,pst）,通过搜索数据库在鼻咽癌细胞系中鉴定了9个p53结合蛋白.分别是热休克蛋白70（hsp70）家族成员grp-78和grp-75、hsp90家族成员grp-94、核纤层蛋白a/c（lamina/c）、α-actinin4、ezrin/cytovillin、dna复制准许因子/mcm3蛋白(dnareplicationlicensingfactor/minichromosomemaintenance3protein,mcm3)、cd98/4f2heavychain和蛋白激酶c（pkc）.并用免疫共沉淀和蛋白质印迹分析技术对hne1细胞蛋白条带3鉴定的p53相互作用蛋白之一hsp78进行了验证.首次在鼻咽癌细胞中鉴定了9个p53结合蛋白，为阐明鼻咽癌中p53蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索.