p450cam突变体蛋白表达、纯化与结晶的改进及其四突变体（f87l/y96f/l244a/v247a）晶体结构

在p450cam突变体蛋白纯化过程中使用280nm/392nm双波长比值检测蛋白质纯度,采用β-巯基乙醇对蛋白质进行还原性保护，有效地缩短了纯化进程，纯化效率相应提高.以peg8000为沉淀剂经悬滴汽相扩散法筛选得到适合衍射的p450cam四突变体（f87l/y96f/l244a/v247a）晶体，在mar-research面探测器系统上收集了0.22nm分辨率的x射线衍射数据.采用同晶差值傅立叶法解析结构，最后的晶体学r因子和rfree分别为0.197和0.247，键长偏差为0.00177nm，键角偏差为1.96°.结构测定显示p450cam四突变体（f87l/y96f/l244a/v247a）和p450cam野生型的整体构象无重大变化，突变后活性口袋变大而疏水性增加，这与突变设计预期目标一致.