裂解性复制诱导产生可视化重组epsteinbarr病毒

为了在病毒的整个基因组中研究基因的功能，分析基因与基因之间的相互作用，含有整个野生型eb病毒(ebv)基因组的bac-ebv质粒(p2089)，首先被转染ebv阴性的hek293细胞，经潮霉素筛选建立了hek293/p2089稳定细胞系.再构建pcdna3.1(+)/bzlf1和pcdna3.1(+)/balf4真核表达质粒，共转染至hek293/p2089细胞内，诱导ebv裂解性复制产生可视化的重组ebv颗粒.重组ebv颗粒感染raji细胞，在倒置荧光显微镜下和流式细胞仪记数gfp阳性细胞，根据这些“绿色raji单位”确定病毒的滴度.在国内首次建立这种以细菌人工染色体(bac)为基础的ebv感染性克隆技术，将允许对eb病毒基因组中任何基因的任何遗传修饰，为在整个基因组中对eb病毒基因功能的研究奠定了基础，也为对ebv与其相关的肿瘤如鼻咽癌发生机理的研究建立了新的技术平台.