一个用于转染细胞分选的双顺反子载体的构建及其应用

为简化转染细胞的分选过程，构建了一个含有细胞表面标志cd34基因的双顺反子载体p3.1-ires-cd34.利用来源于脑心肌炎病毒(emcv)的内部核糖体进入位点(ires)，实现目的基因与cd34基因的共同表达.将绿色荧光蛋白(egfp)作为目的基因插入载体的多克隆位点，然后转染nih-3t3细胞，通过免疫磁珠分选(macs)方法来分选细胞.结果表明：对于转染细胞，均可实现快速分选(瞬时转染细胞约48h，稳定转染10~15天)，并且获得较高纯度(95%以上)的表达目的基因细胞.