成年大鼠海马神经前体细胞表达功能性的l-型钙通道

为了建立一种能够获得高纯度成年大鼠海马神经前体细胞(hpcs)的体外贴壁培养方法，并鉴定hpcs上是否存在功能性l-型钙通道，分离wistar成年大鼠海马组织，制成单细胞悬液，利用无血清培养技术，在添加碱性成纤维细胞生长因子(bfgf)、表皮生长因子(egf)、n2和b27supplement的dmem/f12培养液中进行培养.连续传代，采用细胞免疫荧光法对第六代细胞进行鉴定，呈巢蛋白(nestin)阳性的细胞可达99.9％.把培养高纯度的细胞在分化培养基中诱导分化14天后，表现为神经元和星形胶质细胞的形态，且分别呈ⅲ型β-微管蛋白(tuj1)阳性和胶质纤维酸性蛋白(gfap)阳性.细胞免疫荧光和免疫印迹结果显示，hpcs表达l-型钙通道的cav1.2α1c和cav1.3α1d亚单位，共聚焦钙成像证明了功能性l-型钙通道的存在，并且利用全细胞膜片钳技术记录到了l-型钙电流.以上结果表明成年wistar大鼠的海马hpcs可表达功能性的l-型钙通道.