赭曲霉毒素a的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光免疫分析(trfia)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素a(ota)全自动检测方法.将ota-bsa作为免疫分子免疫balb/c小鼠，ota-klh为筛选用抗原包被板，用间接酶联免疫分析(elisa)法筛选出专一针对ota的高效价的阳性克隆3g9，用杂交瘤细胞制备抗ota单克隆抗体.用ota-bsa包被96孔板为固相抗原，与游离ota共同竞争有限的抗ota单克隆抗体，以稀土离子eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪，采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立ota-trfia.该方法的灵敏度为0.03μg/l，测量范围为0.03~1000μg/l，批内和批间变异分别为3.7%和5.3%，平均回收率为94.2%，与赭曲霉毒素b的平均交叉反应为3.7%，与黄曲霉毒素b1、牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应，说明抗体的特异性很好.8条不同时间进行的间接竞争ota-trfia的效应点均值ed80、ed50、ed20分别为(0.33±0.02)μg/l、(1.44±0.08)μg/l和(5.22±0.12)μg/l，说明方法的稳定性好，样品经trfia和elisa试剂盒同时检测ota，两者的相关系数为0.925，结果相符.研究表明，ota-trfia是目前报道的ota检测中最灵敏的方法，该分析方法稳定性好，可测范围宽，具有很好的应用前景.