两种高效rna干涉载体系统的构建及应用

在真核细胞基因功能研究中，rna干涉(rnai)已成为一种强有力的选择性沉默基因表达的实验工具.建立一套可在哺乳动物培养细胞中高效、经济地表达sirna的载体系统是rna干涉研究的必要前提之一.从hepg2细胞基因组dna中克隆得到h1全长启动子(374bp)，以之为基础构建了两套rna干涉载体系统，psl和带有绿色荧光蛋白(egfp)标签的pesl，并对p53基因进行了相应的rna干涉研究.干涉质粒瞬时转染hepg2细胞后，分别利用半定量rt-pcr和蛋白质印迹检测p53表达水平.与商品化载体psilencertm3.1-h1hygro相比，psl和pesl对p53基因表达具有更高的干涉效率.结果显示：干涉载体psl和pesl能高效特异地下调目的基因表达，可作为哺乳动物中基因功能分析的有效工具.