白血病抑制因子lif第29位氨基酸突变导致其功能完全丧失

白血病抑制因子(lif)为一种多功能细胞因子，在生物发育及维持正常生理功能中发挥着重要的作用.lif在所有的哺乳动物中都具有高度的保守性，某些氨基酸在不同物种中保持不变.lif中29位氨基酸在所有的哺乳动物中都是q.为了研究q对lif功能的重要性，利用随机pcr的方法将29位氨基酸突变为r，并将突变后的lif克隆到真核表达载体pcdna6，在哺乳动物细胞中成功表达.同时以克隆到的野生型lif作为对照.将分泌到细胞培养基中的野生型和突变lif因子收集，通过emsa实验以及荧光素酶报告系统检测，发现野生型lif因子具有激活stat3信号通路的生物学活性.同时，3h-tdr掺入实验结果表明，野生型lif因子能显著抑制鼠骨髓白血病细胞系m1的增殖.而29位氨基酸突变的lif因子则完全丧失了以上功能，但所发现的突变没有显性负的作用.结果充分说明，lif中高度保守的29位氨基酸对lif功能的维持具有重要的作用.