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生物化学与生物物理进展 2005
一种可转移的重组工程系统pym-red的建立Keywords: 重组工程,red,重组系统,gap-repair,体内克隆,pym-red,质粒 Abstract: 重组工程是近几年发展的新型遗传工程技术.以pcr扩增的线性低拷贝质粒pacyc184为载体，用gap-repair方法从大肠杆菌dy330染色体上直接体内亚克隆了包括red重组酶基因在内的长约6.7kb的基因序列，构建了pym-red重组质粒.在宿主菌w3110体内进行了染色体上galk基因的敲除，验证了red重组酶的生物功能，并确定了影响pym-red重组效率的诱导时间和线性dna片段用量.在42℃诱导10min和线性dna打靶分子浓度为300ng时，pym-red的重组效率可达到大约每4000个电转存活细胞中有1个重组阳性克隆，分别比pkd46和pbr322-red系统高5~6倍.
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