日本血吸虫新抗原基因的筛选、克隆、表达和免疫效果研究

为了寻找日本血吸虫(schistosomajaponicum，sj)新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究，用sj雌虫抗原免疫家兔制备血清，对sj成虫cdna文库进行免疫筛选，将获得的新基因(命名为sj-f1，genbank登录号为ay261995)克隆入原核表达载体ptwin1和真核表达载体pcdna3，经pcr、限制性酶切筛选和鉴定阳性重组子.将ptwin1/sj-f1质粒转化大肠杆菌er2566，在低温和低iptg浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白(rsj-f1/intein2)，并经sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)和蛋白质印迹(westernblot)分析鉴定.将pcdna3/sj-f1质粒转化大肠杆菌er2502，大量制备dna疫苗.用重组融合蛋白和dna疫苗免疫小鼠，末次免疫后2周用sj尾蚴进行攻击感染.感染后42天剖杀冲虫，计算减虫率和减卵率.感染前采血用elisa法检测抗体.免疫保护效果测定显示：重组蛋白疫苗以fca作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫分别获得了28.07%、24.69%的减虫率和48.30%、46.38%的减卵率；dna疫苗(pcdna3/sj-f1)单独免疫获得了18.47%的减虫率和35.06%的减卵率；用dna疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经皮下加强免疫，减虫率和减卵率分别提高到了40.42%和56.17%；用dna疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经黏膜加强免疫，减虫率和减卵率增高更明显，分别提高到了42.38%和62.87%.结果表明，sj-f1重组蛋白疫苗及dna疫苗均可诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力，两者联合免疫保护效果优于单一疫苗.