tet调控的脑相对特异性新基因lrrc4表达细胞系的构建

lrrc4是一个在脑相对特异性表达的富亮氨酸重复超家族新成员，在神经胶质瘤表达明显下调或缺失且具有抑制脑胶质瘤细胞生长的潜能.利用tet-on基因表达系统，经过两轮转染，先后将调控质粒ptet-on和表达质粒ptre-2hyg-lrrc4转染u251细胞系，分别用g418和潮霉素hygromycin进行两次筛选.在第一轮挑取的80个克隆中，利用ptre-2hyg-luciferase报告基因进行最佳的低背景高表达的ptet-on细胞克隆筛选，在通过量效关系和动力学检测筛选的最佳克隆基础上，再进行ptre-2hyg-lrrc4的转染，并通过rt-pcr和rna印迹检测，成功获得了两个具有良好诱导性tet调控的lrrc4双稳定表达细胞系，为进一步阐明lrrc4在脑胶质瘤发生发展中的作用，提供有利的研究基础和理想的实验平台.