用质粒作底物测定核糖体失活蛋白酶活性的新方法

植物核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingprotein，rip)是一类能作用于核糖体最大rna的独特蛋白质.它是研究蛋白质生物合成中核糖体rna结构与功能的有力工具.利用rip能在dna中脱去一些腺嘌呤碱基使超螺旋dna解旋的特点，分别以常用的质粒puc18、puc19和pbr322dna为底物，建立了测定rip酶活性的一种新方法，其灵敏度是50ng(天花粉蛋白)和5ng(还原型的辛纳毒蛋白)，酶催化反应的时间是60min.这个新方法具有方便、快捷、灵敏的特点，避免了常用方法中制备核糖体、提取rna的仪器和技术条件的限制，检测的时间由原来的几天缩短到约120min，大大地降低了检测的费用，为广泛和深入地研究rip提供了有利的条件.